Wij (de tweedejaars) zijn momenteel bezig met het vak biochemie. Op het lab zijn we aan het werk met het enzym lactaatdehydrogenase (LDH). Op de eerste practicumdag hebben we dit zelf geïsoleerd uit runderhart. LDH is betrokken bij de energieproductie in cellen. We bepalen onder andere de activiteit van LDH onder verschillende omstandigheden en er is een zuivering uitgevoerd om LDH van andere eiwitten te scheiden.
Afgelopen vrijdag hebben we met behulp van gel elektroforese de molaire massa van LDH bepaald. Omdat hier erg veel theorie achter zit zal ik de grote lijnen van het practicum beschrijven, zodat jullie vooral te weten komen hoe zo’n dag nou in elkaar zit. Wel handig om te weten: de 2e jaars hebben soms dagen op het lab van 08:30 tot 16:40, in het eerste jaar heb je uitsluitend halve dagen van 08:30 tot 12:10.
Het basisprincipe van gel elektroforese is het scheiden van bijvoorbeeld stukken DNA of in dit geval eiwitten, zodat je er meer over te weten kan komen. Dit gebeurt met een spanningsverschil. De eiwitten worden op grootte gescheiden. Grote eiwitten komen moeilijk door de poriën van de gel heen, maar de kleine komen gemakkelijker door de poriën heen dus zullen die lager in de gel te zien zijn.
Tijdens deze practicumreeks werk je met zijn 2en. Voordat je het lab op gaat bereid je alles voor. Als eerst moesten we opstelling voor de gel maken om de elektroforese mee uit te voeren. Daarna moesten we de gel zelf maken. De stoffen waarmee we werkten zijn giftig, dus we moesten in de zuurkast werken met handschoenen aan en een bril op.
Zodra we alles bij elkaar gevoegd hadden moesten we de oplossing zo snel mogelijk in de gelhouder pipetteren omdat de gel snel stolt. In elk practicum gaat er wel eens wat mis, zo ook hier: de gelopstelling lekte aan de onderkant. Voordat we het gerepareerd hadden was de gel al gestold in ons bekerglas, dus moesten we de oplossing voor de gel opnieuw maken. Dit soort dingen komen elk practicum voor en zijn heel normaal, dus wees niet bang om iets fout te doen want dan doe je het gewoon opnieuw! Bij Anna en Charlotte was de gel er zelfs helemaal onderuit gelopen. Dat werd voorzichtig schoonmaken.
Terwijl de opnieuw gemaakte gel goed aan het stollen was in de houder hebben we de eiwitten die we op de gel moesten brengen klaargemaakt met een zo genoemde samplebuffer. Dit zorgt ervoor dat de stoffen netjes in de slotjes zakken en niet door de buffervloeistof gaan zweven. Ook krijgen de stoffen een kleur en een lading, de kleur zodat je in de gel kan zien hoe ver je eiwitten er door heen lopen en de lading zodat de eiwitten door de gel heen getrokken worden.
De verschillende stoffen werden voorzichtig in de slotjes gepipetteerd, en daarna werd er op 60 V geëlektroforeerd. Toen de eiwitten helemaal door de gel heen waren moest er nog gekleurd worden zodat er bandjes zichtbaar werden. Er werd een foto gemaakt met een speciaal apparaat.
De bandjes geven eiwitten aan. Een van deze bandjes is dus LDH. Met behulp van de marker links waarbij de massa van elk bandje bekend is kan de massa van LDH bepaald worden. De uitwerking van dit practicum wordt gedaan in de uitwerkingsles.
Dit is dus een gemiddelde practicumdag van een biochemie practicum. Voor de eerstejaars zijn de experimenten korter, zodat het in een halve dag past. Ik vind practica erg leuk omdat je bezig bent met het verwerken van de theorie en je er dan een beter beeld bij krijgt. Ik hoop dat jullie op deze manier een beter beeld gekregen hebben bij een practicum op deze studie!
Groetjes,
Kes
Lab My Life 